ADN recombinante en la naturaleza y ADN recombinante artificial en Neumonía por influenza

ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA

Las bacterias sufren varias tipos de recombinación que hace posible la transferencia de genes entre especies no afines. Un proceso conocido como la transformación permite que las bacterias capturen DNA libre del ambiente. También puede haber transformación cuando las bacterias capturan diminutas moléculas circulares de ADN llamados plásmidos.

La gran abundancia de genes de origen bacteriano en el genoma nuclear de P. purpureum ha sido de gran interés por ello han secuenciado ese genoma demostrando  un sistema de transformación genética que parece exhibir una tasa relativamente alta de recombinación homóloga. El mantenimiento del plásmido en P. purpureum. depende de los orígenes bacterianos de la replicación y, por lo tanto, representa un caso interesante de intercambio de ADN y compatibilidad genética entre dos dominios diferentes de la vida (bacterias y eucariotas). Por lo tanto, proponemos que la presencia frecuente de plásmidos en las algas rojas  podría explicarse por la compatibilidad de los sistemas de replicación de plásmidos en bacterias con la maquinaria de replicación de ADN que opera en el núcleo de algas rojas.

ADN RECOMBINANTE ARTIFICIAL

Una nueva vacuna contra la influenza A se realizó mediante la fusión genética de los aminoácidos 2–16 de M2e (proteína matriz 2) del virus  al extremo N de la proteína pVIII de la cubierta principal para generar fagos híbridos que contienen capsómeros. Los fagos f88 − M2e2-16 recombinantes resultantes que forman una estructura helicoidal alrededor del ADN genómico circular monocatenario no matan a su huésped, sino que se comportan como una infección persistente que frena el crecimiento bacteriano, con nuevos fagos que brotan continuamente de la E. coli. La inmunización con f88M2e2-16 indujo niveles de anticuerpos protectores mejorados dramáticamente después de la segunda y tercera inyección y confirió una protección completa.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6110788/
2. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4431709/
3.https://espanol.cdc.gov/enes/flu/protect/vaccine/qa_flublok-vaccine.htm
4. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK21881/

Microarray de Influenza

Genotipado y detección de virus de influenza de origen aviar y humano comunes mediante un microarray de imágenes de quimioluminiscencia portátil

Los virus de la influenza se dividen en tres tipos, A, B y C. Los virus de la influenza humana A y B pueden causar epidemias estacionales, pero la influenza C causa solo una enfermedad respiratoria leve. El virus de la influenza A puede infectar varias especies hospedadoras. En 2013, la influenza aviar A (H7N9) infecciosa para humanos se reportó por primera vez en China. Para la segunda semana de 2014, había 210 casos humanos confirmados por laboratorio en el país, y la tasa de mortalidad llegó a un 22%. El diagnóstico rápido y preciso de los virus de influenza es importante para el manejo clínico y la epidemiología.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5080273/

Análisis de PCR

T: Un RT-PCR en tiempo real de tetraplex de nuevo desarrollo para la detección simultánea de los tipos de virus de influenza A, B, C y D

O: Desarrollar  una herramienta de diagnóstico rentable para programas de vigilancia a gran escala dirigidos a los cuatro tipos de virus de influenza mediante la transcripción reversa en tiempo real - reacción en cadena de la polimerasa (rRT-PCR).

MB: Frotis nasales, tejidos pulmonares, fluidos orales y un lavado de pulmón.

AN: ADN genómico

G: Gen que codifica para la Hemaglutidina y Neurominidasa

Tipo de PCR: Reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR)

Pasos: Dado que el ARN usualmente es de una sola hebra es necesario hacer una transcripción reversa (RT) antes de iniciar la amplificación por PCR. 

Los pasos de la RT-PCR son:

Transcripción reversa: Unión del partidor a la secuencia de ARN objetivo.

Transcripción reversa: La polimerasa rTth cataliza la extensión del partidor mediante   la  incorporación de nucleótidos complementarios.

Fin de transcripción reversa: Se obtiene la hebra del cADN complementario al ARN

Desnaturalización: 95 °C por un minuto

Anillamiento: 54 °C por varios segundos

Extención: 72° C a 2 minutos

Especificidad analítica: Los seleccionados de cebadores y sondas se evaluó en una amplia gama de cepas de influenza y virus respiratorios distintos de la influenza. Se encontró que el conjunto H2-2 tiene una especificidad insuficiente para detectar virus de influenza A estacional (H1N1) y fue excluido de un análisis posterior. Mientras que el conjunto NA tiene una especifidad alta para detectar los virus B y C.

Sensibilidad analítica: El límite de detección para los cebadores-sonda fue de 3,2 (IC95%: 3,07). -3.48) lg EID50 / ml. Se utilizaron estándares basados ​​en copias para determinar el límite de detección del tetraplex RT-qPCR. Se evidenció un LOD de 10 copias de objetivos para los cuatro objetivos cuando solo estaba presente uno de los cuatro objetivos.

Análisis del límite de detección del ABCD tetraplex RT-qPCR basado en el valor medio de las diluciones seriadas por triplicado de 10 veces el ARN viral transcrito que la respuesta de 10 8 a 1 copias / reacción (A1 - D1)

Referencia Bibliográfica

1. https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1111/irv.12613

Prueba de tamizaje y confirmatoria de la Influenza

Prueba rápida del antígeno de la influenza (hisopado nasal o faríngeo)

Esta prueba también conocida como prueba rápida de diagnóstico de la influenza o  RID, detecta rápidamente los signos del virus de la influenza A e influenza B en una muestra de secreciones de su nariz o garganta. Para este análisis, se requiere una muestra de flema u otras secreciones de su nariz o garganta. Su proveedor de atención médica usará un hisopo estéril para recolectar la muestra. Otra forma de tomar una muestra requiere un aspirado nasofaríngeo. En este procedimiento, un proveedor de atención médica inyectará solución salina en su nariz y, luego, recolectará la muestra.

RT-PCR

La influenza es un virus que puede detectarse en muchas clínicas a  través de la identificación de ácidos nucleicos como la RT-PCR. La técnica se fundamenta en la propiedad de la transcriptasa inversa para realizar la conversión del RNA a cDNA y posteriormente de la habilidad que tienen las DNA polimerasas para replicar hebras de DNA tras cada fase de replicación.

Cuando la cantidad es limitada, la RT-PCR ofrece mejores posibilidades que el aislamiento. Sin embargo este método depende de secuencias conservadas, por lo que cambios genéticos pueden modificar la sensibilidad del mismo.

Referencias Bibliográficas
http://carefirst.staywellsolutionsonline.com/Spanish/RelatedItems/167,rapid_influenza_antigen_ES
https://espanol.cdc.gov/enes/flu/professionals/diagnosis/table-testing-methods.htm